蓝白斑筛选原理 蓝白斑筛选原理简答

为什么dna重组只筛选出白菌落

1、一般白斑表示有目的基因插入lacZ，破坏其功能，而不能正常合成酶降解底物，从而不出现蓝斑。因此重组的载体一般LacZ的活性已被破坏，产生白斑，但是有时你插入的目的基因短，使得LacZ基因没有完全破坏的话，可能会出现淡蓝的斑。

2、初步筛选载体质粒DNA pBS上带有Ampr 基因而外源片段上不带该基因，故转化受体菌后只有带有pBS DNA的转化子才能在含有Amp的LB平板上存活下来；而只带有自身环化的外源片段的转化子则不能存活。此为初步的抗性筛选。

3、由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

4、诱导后，在含有X-gal的培养基平板上形成蓝色菌落。而当有外源DNA片段插入到位于lac Z′中的多克隆位点后，就会破坏α肽链的阅读框，从而不能合成与受体菌内突变的β半乳糖苷酶相互补的活性α肽，而导致不能形成有功能活性的β半乳糖苷酶，因此含有重组质粒载体的克隆往往是白色菌落。

5、由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。

6、当外源片段插入到载体的多克隆位点上后会导致读码框架改变， 表达蛋白失活， 产生的氨基酸片段失去α-互补能力， 因此在同样条件下含重组质粒的转化子在生色诱导培养基上只能形成白色菌落。

α-互补与蓝白斑筛选的关系

二者相同。细菌的篮白斑筛选又称α互补法，是根据组织化学的原理来筛选重组体的方法。α互补可在指示平板上通过颜色筛选鉴别。

在重组质粒中插入片段使α-肽失活，可在指示平板上通过颜色筛选鉴别。不带有插入片段的载体，表达有功能的β-半乳糖苷酶，所用的宿主菌在染色体或附加体上缺失掉lacZM15基因，导致内源α-肽失活。

由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

这种lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酸阴性突变体之间实现互补的现象叫α-互补。

蓝白斑筛选问题!!

1、选择正确的斑点：在开始蓝白斑筛选之前，第一步就是选择正确的斑点，这些斑点会最大化图案细节，使其更加清晰。调整斑点大小：在确定斑点位置后，接下来就要调整斑点的大小，以使图案更加清楚可见。调整斑点强度：根据需要，可以调整斑点的强度，以突出图案中的重要信息。

2、休克温度：42度即可，没必要45度。45秒没问题，实际上30~90秒都可以，我一般用45秒。5：连接：4度过夜已经足够，除非你的片段很长。6：蓝白斑筛选：有可能淡蓝色的蓝斑是你需要的克隆，如果你的克隆浅蓝色的斑很多，更可能是这样。

3、说明你重组质粒连接效率低或者自连严重。还有可能是你的插入片段太短，并且刚好和lacZ使用同一个读码框，造成半乳糖甘酶具有部分活性。是的。我建议你重做一次连接和转化。注意使用的双酶切，并且内切酶不要是同尾酶。

4、那么，那些带一点蓝色的白斑你有没有做菌液PCR呢？或者测序呢？我以前有见过带点蓝色的白斑，其实也是蓝斑。没有白斑的原因，要么是没连上，要么是没转化成功。

5、由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

6、蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。

简述α互补和蓝白斑筛选的原理

这种lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酸阴性突变体之间实现互补的现象叫α-互补。

由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

蓝白斑筛选的原理 分类：生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。

可使菌落或噬菌斑呈兰色 你的空载提转进去的话，IPTG诱导lacZ 表达α肽，互补体内缺陷的酶，然后可降解底物X-gal，产生蓝斑；如果你则载体的多克隆位点插入了片段，导致编码的α肽错误，或者不能编码α肽，也就不能产生正常功能的酶，无法分解X-gal，所以长白斑。

二者相同。细菌的篮白斑筛选又称α互补法，是根据组织化学的原理来筛选重组体的方法。α互补可在指示平板上通过颜色筛选鉴别。

蓝白斑筛选重组质粒实验中为什么用IPTG做为诱导物

1、由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

2、IPTG是为了诱导乳糖分解相关酶的编码基因表达，使得培养基中的乳糖得以被分解产生半乳糖。X-gal一种酵母半乳糖苷酶显色底物，可以与分解产生的半乳糖结合生成蓝色物质，用于蓝白斑筛选。

3、x-gal是显色剂，amp是抗生素，iptg是诱导剂。在蓝白斑筛选中，iptg可以诱导x-gal显色。amp用于抗性筛选。

4、称之为泄漏表达。科学研究：IPTG常用于需要诱导β-半乳糖苷酶活性的克隆实验。它常与X-Gal或Bluo-Gal结合使用，用于重组细菌菌落的蓝白筛选，这些菌落可以诱导lac操纵子在大肠杆菌中的表达。IPTG与lacI阻遏蛋白结合并改变其构象而发挥作用，防止β-半乳糖苷酶编码基因lacZ的抑制。

5、在实验条件下，当使用诱导剂IPTG并伴随生色底物X-Gal时，LacZ+细菌会产生蓝色菌落，这使得它们在众多细菌中易于辨认。然而，引入外源DNA到质粒的多克隆位点后，通常会导致重组质粒的氨基端片段丧失α-互补能力，使得细菌形成白色菌落，即我们所说的蓝白斑。这种筛选过程是用于识别含有重组质粒的细菌。

6、然而当外源DNA 插入质粒位于α-肽编码序列中的多克隆位点时，由于破坏了α-肽的阅读框架，因而不能表达出与宿主菌基因组表达的缺陷型β-半乳糖苷酶多肽发生α-互补。由于没有β-半乳糖苷酶的酶解作用，致使重组菌形成白色菌落。

蓝白斑筛选的原理是什么

由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。

你是在说蓝白斑筛选吧~培养基中本身就有抗生素，转了质粒（含抗性基因）的细菌才能在培养基上长出来。

利用乳糖操纵子系统。野生型埃希氏大肠菌（E.Coli）产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。

蓝白斑筛选的机理 由α-互补产生的Lac+ 细菌较易识别，它在生色底物X-gal（5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）下存在下被IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）诱导形成蓝色菌落。